岛津中国率先推出遗传毒性杂质nmba(n-乐鱼apo

2019-07-09

  2019年3月1日,美国食品和药物管理局(fda)在乐鱼apo官网发布血管紧张素ii受体阻滞剂(arbs)药物氯沙坦的自愿召回公告,涉及到印度hetero labs ltd.生产的87批氯沙坦钾片,而导致该召回的主要原因是发现其中含有n-亚硝基-n-甲基-4-氨基丁酸(nmba)杂质。由于nmba是已知动物和潜在人类的致癌化学物质,是继n−亚硝基二甲胺(ndma)和n−亚硝基二乙胺(ndea)之后上市arbs药物中检测到的第三种亚硝胺类遗传毒性杂质。此后,fda相继公布了teva pharmaceuticals和vivimed life sciences pvt ltd等制药公司自愿召回涉及氯沙坦钾的63批药品,其原因为检出含有nmba。同时,加拿大卫生部(hc)及英国卫生部(dhsc)也在乐鱼apo官网上发布了氯沙坦类药物的召回公告。直至2019年6月12日,teva pharmaceuticals仍在扩大自愿召回7批检出nmba氯沙坦钾片,可见药物中的遗传毒性杂质仍受到公众及药品监管机构的高度关注。

  在fda已公布的arbs药物亚硝胺杂质限度表中,nmba的日允许摄入量最大值为0.96ppm。 fda评估了暴露于9.82ppm水平nmba相比于终生暴露于0.96ppm nmba的服药水平,表明6个月的暴露量不会存在患癌风险。


n-亚硝基-n-甲基-4-氨基丁酸(nmba)
n-nitroso-n-methyl-4-aminobutyricacid(nmba)
cas. 61445-55-4

  因此,为了确保患者在缓冲期可获得氯沙坦类药物,fda不反对含nmba低于9.82ppm的氯沙坦保持销售。该过渡缓冲期fda设为6个月,直至生产企业提供亚硝胺杂质符合要求的氯沙坦药物来填补市场。

目前,关于氯沙坦钾中nmba的检测方法尚未见公开报道,为及时应对市场检测需求,岛津中国率先推出了基于lc-ms/ms技术的检测方法,该方法操作简单,灵敏度高,适用性强,可有效用于氯沙坦钾中nmba的分析检测。

1、 实验部分

1.1 仪器: lcms-8050三重四极杆质谱仪联用仪,含有:lc-30ad×2输液泵,dgu-20a5r在线脱气机,sil-30ac自动进样器,cto-30a柱温箱,cbm-20a系统控制器,lcms-8050三重四极杆质谱仪,labsolutions(version 5.82 sp1)色谱工作站。

1.2 分析条件:

液相色谱条件

色 谱 柱 :shim-pack xr-ods ii 2.0 mm i.d.× 100 mm l., 2.2 μm
流 动 相 :a相-0.1%甲酸水溶液;b相-甲醇
流 速 :0.3 ml/min 柱温 :40℃
进样体积 :2 µl 洗脱方式 :梯度洗脱

 

质谱条件

离子化模式 :esi,正离子检测 碰撞气 :氩气 270 kpa
雾化气流速 :3.0 l/min 加热模块温度 :400℃
加热气流速 :10.0 l/min 干燥气流速 :10.0 l/min
接口温度 :300℃ 扫描模式 :多反应监测(mrm)
dl温度 :250℃ mrm参数 :见下表

 

1.3 标准品溶液:取nmba标准贮备液,以纯甲醇逐级稀释为0.5、1、2、5、10、20、50、100 ng/ml的八个不同浓度的混合标准工作溶液。

1.4 样品溶液:取氯沙坦钾三批原料药(符合ep9.0)0.1 g于10 ml容量瓶中,加甲醇适量,超声1 min至全部溶解,放冷至室温,用甲醇定容待测。

2、 结果

2.1标准品色谱图


图1. nmba标准品色谱图(100 ng/ml)
(黑色-总离子流;粉色-mrm147.15/117.10;蓝色-mrm147.15/87.10;棕色-mrm147.15/44.10)

2.2 线性关系及检出定量限


图2. nmba标准曲线
检出限(lod)0.5 ng/ml(mrm147.15/117.10),定量限(loq)1.0 ng/ml (mrm147.15/117.10)

2.3 精密度实验:10 ng/ml标准溶液为样本连续进样,日内及日间保留时间相对标准偏差低于0.1%,峰面积低于1.10%。

2.4 加标回收实验

取0.1 g氯沙坦钾样品于10 ml容量瓶中,加入nmba标准品溶液(相当于50、100、200 ng nmba标准品),按照1.4中的方法进行处理,上机分析。加标的氯沙坦钾溶液色谱图(以200 ng加标量为例)见图3。三个平行样品的低中高平均回收率分别为98.04%,94.40%,95.61%。


图3 nmba加标量为200 ng时氯沙坦钾溶液色谱图

2.5 检测结果:三批样品中nmba均低于最小检出限(lod)。

3、 结论

  本工作建立了使用lcms-8050三重四极杆质谱联用仪测定氯沙坦钾原料药中n-亚硝基-n-甲基-4-氨基丁酸(nmba)杂质的方法,在0.5~100 ng/ml浓度范围内线性关系良好,检出限和定量限分别为0.5 ng/ml和1.0 ng/ml。使用此方法对三批次氯沙坦钾原料药进行了测定,结果为nmba未检出。本方法简单、快速、灵敏、准确,可有效用于氯沙坦钾原料药中nmba的分析检测。

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