科技创新:岛津技术揭示雪卡毒素(ctx)及其类似物高灵敏度检测新方法 | 岛津分析检测-乐鱼apo

2023-11-06

前言

  雪卡毒素(也称西加毒素)中毒是由雪卡毒素(ctxs)引起的,是世界上常见的食物中毒来源之一,据调查,ctxs每年大约造成5万人中毒,是造成人类中毒分布最广、人数最多的一种海洋毒素之一。目前发现ctx的类似物有30余个。

  雪卡毒素是一种由底栖甲藻产生的热稳定脂溶性聚醚毒素,在天然样品中以微量存在,当浓度达到0.2μg/ kg时具有神经毒性作用,ctxs的半数致死量(median lethal dose,ld 50)为0.45 μg/kg,比河豚毒素(tetrodotoxin,ttx)的毒性还要强100倍,是重要的神经毒素。美国 fda 和 efsa 建议控制水平为 0.01 μg ctx1b 当量/kg。

  根据岛津新发布的一项技术,通过向流动相中添加非常少量的碱金属(如na 和li )来优化一种使用钠和锂加合物[m na] 和[m li] 离子检测ctxs的高灵敏度方法。通过这项技术,可以使用lcmsms成功分离及检测fda推荐的低浓度的ctxs。本文介绍了[m li] 新方法的分析条件和准确度。

ctxs标准品

  1、5种ctx类似物的标准品由jfrl(日本食品分析中心)提供

  2、9种ctx类似物的混标样品由nihs(日本国立医药品食品卫生研究所)提供

分析条件

  仪器型号:nexera x3 uhplc lcms-8060nx

  分析结果

  1、[m na] 或[m li] 离子的形成和碰撞能(ce)的优化

  在流动相中添加na 或li 会通过阳离子化增加钠或锂加合物的形成。为了获得所需的离子[m na] 或[m li] ,可在流动相中加入微量碱金属。下图为不同流动相条件下ctx1b的分析示例,本研究中分析的其他目标化合物也获得了相同的结果。当向流动相中添加li 时,未检测到 [m na] 。这些结果表明,可以通过使用[m li] 等替代离子来实现更高的灵敏度。

考察不同流动相条件下ctx1b的分析结果(sim)

  但是,[m na] 和[m li] 母离子没有提供任何有用的产物离子,因此优化ce用以监测[m na] >[m na] 或[m li] >[m li] 在mrm分析模式下提供最高的信噪比。ctx1b的优化ce如下表所示。其余8种类似物的最佳ce以类似的方式进行了优化。

ce与峰面积或信噪比之间的关系

  2、改善色谱峰分离度和灵敏度

  在下图中,比较了使用文献方法、添加na的流动相(b)和添加li的流动相(c)对目标化合物的分离。2,3-dihydroxyctx3c和51-hydroxyctx3、49-epi-ctx3c和ctx3c、ctx4a和ctx4b在新条件下表现出明显更好的分离。除2,3-dihydroxyctx3c和51-hydroxyctx3外的6种类似物和ctx3c在加na流动相中具有良好的灵敏度。实验证实,使用添加li的流动相时,9 种ctx类似物的灵敏度相当。

9 种ctx类似物的mrm色谱图(1 ng/ml nihs混标样品)

  3、定量限(loq)的评估

  使用jfrl标准品生成校准曲线,以确认[m li] > [m li] 。校准曲线最低点的每个色谱图如下图所示。确定校准曲线的范围,使每个校准点的3次重复分析的平均准确度为100±5%,并指定最低点作为 loq。用5 g鱼肉制备1 ml测定溶液时,5种标准品的loq范围为0.0004至0.0012μg/kg。

校准曲线最低点的mrm色谱图

小结

  岛津最新的技术介绍了一种通过向流动相添加微量碱金属(如na 和li )来提高ctx检测灵敏度的方法。这项工作成功证明了使用lc/ms/ms在低浓度下分离和检测ctx类似物,符合fda限度要求。

  注:本产品仅用于研究,不能用于医疗诊断目的。

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