糖链结构分析 | 岛津分析检测-乐鱼apo

老鼠单克隆抗体的糖链结构分析

由于在蛋白翻译后多种酶活动,在糖蛋白比如抗体药物里的糖链是变化的,糖链结构的多变性和非一致性是一个无法回避的问题。
尽管如此,指导方针还是要求了最大可能限度的糖链结构分析。例如,由于岩藻糖(糖链的一种分成)的存在与依赖抗体的细胞毒性(adcc)之间关系已经被报,为了研发而分析抗体药物里糖链的重要性将会在未来继续提升。

这是一个分析商业化小鼠单抗糖链的例子。

检测、研究流程

 

  1. 根据染色胶上的抗体,切割sds-page条带。
  2. 用pngasef进行胶内酶解。
  3. 纯化糖链并用blotglyco kit (sumitomo bakelite) 氨基吡啶标记。
  4. prominence nano/accuspot/axima resonance进行msn分析

 

结果

表1显示了检测到的离子m/z值和prominence nano的洗脱时间。m/z值用平均质量数来表示(整数值)。检测到七个离子:m/z 1418、 m/z 1580、 m/z 1564、 m/z 1726、 m/z 1888、 m/z 2047、和m/z 2209。

表1. 糖链衍生离子和检测时间

fig.1 显示了m/z 1580和m/z 1726的ms/ms和ms/ms/ms图谱。预期的糖链结构显示在图里。软件可以轻松地确定岩藻糖的存在,牵涉到adcc。

除了fig.1的糖链,其他糖链的存在也通过结构确认,比如g0-f, g0, g1'-g1', g2, g0 s, 和 g2 s。

因为这个分析使用了从凝胶上切割下来的抗体作为起始物,需用prominence nano/accuspot进行痕量分析。

fig. 1 ms/ms 和 ms/ms/ms 谱图预测糖链结构

axima resonance maldi-tof ms

• prominence nano lc 实现高灵敏度的糖链解析。独特的逆流控制系统加强了分离重现性,专门的 nano-assist软件简化了自动化及参数设定。
• accuspot 自动添加基质并将prominence nano lc分离的糖链定位至maldi靶板。
• prominence nano分离纯化糖链混合物可减少由杂质引起的离子抑制。
• 分析软件提供了强大的糖链结构解析支持。

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